內(nèi)部材料：農(nóng)藥殘留量分析

農(nóng)藥殘留量分析
    目的要求
初步掌握農(nóng)藥殘留量分析的最基本操作技術(shù)和方法。
原理
殘留量分析的基礎(chǔ)是色譜法，應(yīng)用薄層色譜和氣相色譜法，農(nóng)藥分析的檢測(cè)水平可達(dá)到10－6－10－12g。
薄層色譜法是在玻璃板上用吸附劑（硅膠、氧化鋁等）鋪成薄層作為固定相，常用吸附劑一般都是粒度比較細(xì)小的多孔性物質(zhì)，其吸附現(xiàn)象主要是物理吸附，當(dāng)固體吸附劑與溶劑（流動(dòng)相）把試樣展開(kāi)時(shí)，作為流動(dòng)相的液體從固體組成的固定相的間隙中通過(guò)，由于試樣（溶質(zhì)）中各組分對(duì)吸附劑親和力大的溶質(zhì)與溶劑（流動(dòng)相）競(jìng)爭(zhēng)能力強(qiáng)一些，因而被吸附得多一些；與吸附劑結(jié)合得牢固性也強(qiáng)一些，因而被吸附的多一些；與吸附劑結(jié)合得牢固性也強(qiáng)一些。反之，親和力小的溶劑，競(jìng)爭(zhēng)能力小一些，吸附量也少一些，這種不同溶質(zhì)得競(jìng)爭(zhēng)能力得差別便是吸附劑能將混合物組分分離的基礎(chǔ)。當(dāng)我們加一小滴混合物得樣品溶液于薄層板上的時(shí)候，全部物質(zhì)吸附于原點(diǎn)上，接著，我們用溶液進(jìn)行展開(kāi)，此時(shí)吸附物部分的解析，解吸也遵循競(jìng)爭(zhēng)規(guī)則，即親和力大的吸附物難解吸一些，而親和力小的吸附物則易于解吸，溶劑攜帶著解吸后的溶質(zhì)向前移動(dòng)時(shí)，又會(huì)遇到新的吸附劑，于是溶液中的溶質(zhì)又重新被吸附。這是，吸附同樣要遵循競(jìng)爭(zhēng)規(guī)則。因?yàn)椴粩喙┙o新鮮溶劑，所以解吸－吸附－解吸的過(guò)程也是不斷重復(fù)進(jìn)行，并且迫使溶質(zhì)以一定速度向前移動(dòng)。由于各種溶質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間親和力各不相同，移動(dòng)速度也各不相同。這樣，不同物質(zhì)就彼此分開(kāi)了。
實(shí)驗(yàn)方法
取樣：取經(jīng)樂(lè)果處理過(guò)的蔬菜，除去桔黃葉及根，用水洗后瀝干切碎，稱(chēng)取1.5－2.5kg，采樣后的分析工作應(yīng)盡快進(jìn)行，如不能進(jìn)行，應(yīng)在低溫（5－10℃）下儲(chǔ)藏樣品。
提取：從上述切碎樣本中稱(chēng)取100g，加入150ml苯中，經(jīng)搗碎機(jī)快速搗碎2分鐘后，將搗碎樣品置于離心機(jī)（3000轉(zhuǎn)/分）離心10分鐘，抽氣過(guò)濾。濾液再通過(guò)裝3cm無(wú)水硫酸鈉玻璃拄中脫水，用氮?dú)饬鞔禋鉂饪s至10－20ml。
凈化：取具活塞砂芯的玻璃層析管（口徑3cm，高30cm），管內(nèi)底層鋪入用氯仿處理過(guò)的脫脂棉花少量，第二層時(shí)無(wú)水硫酸鈉，第三層是吸附劑(即活性炭2.5g、硅藻土4g、弗羅里土1g、中性氧化鋁5g等均勻混合)，第四層是無(wú)水硫酸鈉，第五層再鋪上少量棉花。凈化柱制完后，用氯仿20ml預(yù)洗一次，打開(kāi)層色柱活塞，把多余的氯仿放出，再把提取濃縮液倒入層析柱中，然后用燒杯接收柱液，用30ml氯仿分3次淋洗，用氮?dú)獯抵良s5ml左右，轉(zhuǎn)移到K、D濃縮管中再減壓濃縮，并定容至1ml，放入冰箱內(nèi)待測(cè)。
制板：取硅膠G6g，加蒸餾水12ml,用研缽混勻成漿液，迅速倒入涂布器內(nèi)涂布于10×12cm的干凈玻璃板上，立即用手提板的一端，而板的另一端靠臺(tái)面而上下振動(dòng)，使?jié){液分布均勻平滑，在室溫下自然干燥，再放入恒溫箱內(nèi)，經(jīng)110℃活化1小時(shí)，移至干燥器內(nèi)備用。
標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：以98％樂(lè)果晶體，用石油醚多次洗滌后，于氯仿中重新結(jié)晶，再用無(wú)水乙醚重結(jié)晶兩次，即得到無(wú)臭白色結(jié)晶樂(lè)果，用熔點(diǎn)及薄層層析法檢驗(yàn)其純度。取純凈樂(lè)果晶體50mg溶于50ml丙酮中，即得1mg/1ml的標(biāo)準(zhǔn)母液（1000ppm），并以此母液稀釋成100、50和20ppm等標(biāo)準(zhǔn)濃度。
回收率
每個(gè)樣本的分析，需檢定所用的分析方法是否準(zhǔn)確，一般檢定采用回收率方法檢驗(yàn)，如果回收率能在80－90％的范圍內(nèi)，即認(rèn)為本法可靠。做法是在無(wú)藥處理蔬菜如以白菜為例，在白菜搗碎之前加入含一定量的樂(lè)果丙酮液（本實(shí)驗(yàn)加500ug樂(lè)果于100g白菜中），混入菜中，經(jīng)搗碎、過(guò)濾、凈化等分析步驟（與樣本處理相同）。通過(guò)點(diǎn)板分析，本法的靈敏度可達(dá)0.05ppm，樂(lè)果的值Rf在0.4－0.5，各次分析重現(xiàn)性良好。
點(diǎn)樣：有兩種。一種是把經(jīng)過(guò)濃縮好的樣本液定量地直接點(diǎn)在薄板上；另一種則先制備好小濾紙片，把樣本液點(diǎn)在濾紙片上，然后把小濾紙片移到薄板上。如果點(diǎn)樣量不大，可以用前一種，而點(diǎn)樣量大則可以用后一種。具體操作是在制好的薄板下端2處定點(diǎn)（一般可以定5個(gè)），把標(biāo)準(zhǔn)液定量地點(diǎn)滴在1、3、5位置上，樣本點(diǎn)在2、4位置上。具體量應(yīng)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)液的顯出靈敏度多少來(lái)決定。
展開(kāi)：采用單向二次層析。第一次為石油醚（沸程60－90℃）∶:苯（1∶1v/v）；第二次為氯仿∶丙酮（8∶2v/v）。
顯色：薄板展開(kāi)后取出，自然干燥，把板置于溴蒸汽中約30秒，取出，揮發(fā)盡溴蒸汽后，噴灑0.4％剛果紅乙醇（50％）溶液。薄層底色為桃紅色，殺蟲(chóng)劑斑點(diǎn)顏色為深藍(lán)色，色差大，斑點(diǎn)輪廓清晰，一般采用玻璃噴霧器噴灑顯色劑，要求噴成霧狀，注意噴霧器和薄板之間距離不宜太近，以免噴灑氣流破壞博板層。
定量：可分粗定量和精確定量。粗定量是自同一樣品吸取不同的量與各種濃度的標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)藥液點(diǎn)在同一塊薄層板上。展開(kāi)顯色后，根據(jù)樣品中農(nóng)藥與標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)藥的斑點(diǎn)面積和顏色的比較，粗略定出樣品中農(nóng)藥的含量。精確定量是根據(jù)粗定量的結(jié)果，將欲分析的樣品吸取一定量，再把標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)藥液及標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)藥的稀釋液一起定于同一塊薄層板上，但標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)藥溶液及稀釋溶液的濃度應(yīng)選擇在樣品粗定量結(jié)果的接近范圍內(nèi)。例如：粗定量的結(jié)果約為每克樣本中含2的農(nóng)藥，則吸取相當(dāng)于1樣品的量點(diǎn)樣時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)藥液的濃度可為3，稀釋液可為1，這樣誤差可控制在1以下。若再多次重復(fù)，取其平均值，可提高定量的精確度。點(diǎn)樣后，按常法進(jìn)行層析。顯色后，用自制測(cè)微方格板，于放大鏡或解剖鏡下數(shù)出三個(gè)斑點(diǎn)面積數(shù)，隨后將三個(gè)斑點(diǎn)面積數(shù)代入下列公式，即可求得未知試樣的量。
另外，也可用標(biāo)準(zhǔn)樣本求出其最低檢出量，然后滴不同量的未知樣品，求出其顯現(xiàn)斑點(diǎn)時(shí)的所需樣本量，再計(jì)算出未知樣品中的農(nóng)藥含量。
農(nóng)藥含量（ppm）=標(biāo)準(zhǔn)液最低檢出量（ug）/點(diǎn)滴樣本克數(shù)
測(cè)微方格板的制法：用繪圖紙畫(huà)成線(xiàn)條清晰、粗細(xì)均勻的小方格（0.25×0.25cm），每5×5小方格畫(huà)一粗黑線(xiàn)大格，大格間的中心處畫(huà)一黑標(biāo)記，共畫(huà)35格大格，然后用黑像反拍，每拍一張后，把照相機(jī)的距離升高一次，這樣制成一套各種尺寸的方格照片，再經(jīng)拷貝制成透明格子的底片。
習(xí)作
1.根據(jù)你進(jìn)行的樣本和標(biāo)準(zhǔn)溶液的斑點(diǎn)面積和顏色的深淺用肉眼觀察定量；并用自制的測(cè)微方格板計(jì)算斑點(diǎn)面積。代入公式，求出樣本的殘留量？
2.應(yīng)用本方法，在一定條件下，其回收率可以達(dá)到80－90％，如達(dá)不到，可能是哪些主要因素影響？

話(huà)說(shuō)，我的畢業(yè)論文就是農(nóng)藥殘留分析…

太專(zhuān)業(yè)了，我就踩踩算了