殺蟲劑觸殺毒力（LD50）測定（點滴法）

殺蟲劑觸殺毒力（LD50）測定（點滴法）

目前使用的殺蟲劑大多數(shù)都具有較強的觸殺作用，所以殺蟲劑的觸殺毒力測定顯得特別重要。觸殺毒力測定有藥膜法、點滴法、噴霧法、噴粉法和浸液法等。
室內(nèi)比較精確的觸殺毒力測定方法是點滴法和藥膜法。本實驗采用點滴法（topical application）。是將一定量農(nóng)藥丙酮液點滴在蟲體的一定部位上，藥劑可能自體壁進入體內(nèi)。
目的要求
通過本實驗可以學(xué)習(xí)到一種比較準確的殺蟲劑觸殺毒力測定方法，并進行有關(guān)毒力數(shù)據(jù)整理及其可靠性檢驗。
實驗用具
容量瓶（10、25、50及100ml）、微量點滴器或毛細管微量點滴器、吸管、培養(yǎng)皿、燒杯、濾紙、平頭鑷子、計算紙。
實驗材料
乙酰甲胺磷，辛硫磷，丙酮，可選用室內(nèi)人工飼養(yǎng)的粘蟲（Mythimna separta Walker）、玉米螟（Ostrinia furnacalis G）、棉鈴蟲（Heliothis armigera Hubner）或直接采自田間的菜青蟲等4齡幼蟲，荔枝椿象成蟲（Tessaratoma papillosa Drury）也可根據(jù)不同地區(qū)或不同季節(jié)任選一種試蟲。
測試方法（選用玉米螟為實驗材料）
1) 預(yù)備試驗  先用丙酮將乙酰甲胺磷配制成若干個不同濃度，選取4齡玉米螟幼蟲若干，每個濃度用點滴器（或微量進樣器）點滴藥液于幼蟲的胸部背面，每頭蟲點滴1ul,每濃度點滴蟲數(shù)不少于30頭，待藥液干后，把5－8頭蟲盛于一皿中，加入少量飼料，蓋好培養(yǎng)皿，寫好標記，經(jīng)24小時后檢查試蟲的生存及死亡頭數(shù)，計算其死亡率。從這些濃度中找出適合的濃度，即找出其死亡率在20－90％之間的5－7個不同劑量的等比濃度供下一步試驗用。
2) 根據(jù)上步預(yù)備試驗結(jié)果，如本實驗可用乙酰甲胺磷有如下濃度：500、1000、2000、4000、8000、12000和16000ppm�？稍O(shè)7組，每組選擇4齡玉米螟幼蟲210頭，分別放在墊有濾紙的培養(yǎng)皿中（濾紙預(yù)先加濕），每皿放10頭，每種濃度設(shè)有3個重復(fù)。
3) 用微量點滴器盛裝藥液，從低濃度到高濃度點滴，每蟲點滴1ul于幼蟲胸部背板處，待藥液揮發(fā)后，添加適量人工飼料于皿中。對照蟲僅點滴丙酮，其他處理與上不同。
4) 試驗觀察及結(jié)果整理  試驗期間記錄溫濕度，施藥后24小時檢查每種處理的生或死蟲數(shù)。統(tǒng)計各濃度幼蟲的死亡率和校正死亡率％。計算公式如下：

或
最后采用繪圖法或直線回歸方程求LD50，并用方差分析法檢定其可靠性程度。
例如：乙酰甲胺磷對玉米螟幼蟲觸殺LD50毒力測定結(jié)果及檢驗。
１．乙酰甲胺磷對玉米螟幼蟲觸殺結(jié)果（見表6—1）。
2．繪圖法求LD50  此方法以劑量對數(shù)作橫坐標，機率值作縱坐標，繪制直角坐標系．在直角坐標中找出該次試驗的坐標點，并用一直線連接起來，該直線稱“劑量對數(shù)－死亡率機率直線”。從機率值“5”處引一與橫坐標平行的直線與“劑量對數(shù)－死亡機率直線”相交，以相交點引一線垂直于橫軸，此垂線與橫坐標的交點，即為乙酰甲胺磷對玉米螟LD50的劑量對數(shù)值，再查反對數(shù)表，即為LD50值。（見圖6－1）。
因此，乙酰甲胺磷對玉米螟4齡幼蟲觸殺毒力LD50為0.0072ug/頭（試驗時如把幼蟲稱重則其單位可為ug/g）。
３．劑量對數(shù)機率值直線的驗證及LD50的計算
1) 求直線回歸方程  y=a+bx
2)        求LD50（用回歸直線計算）。
因為當(dāng)機率y=5時即為50％的死亡率，所以將y=5代入回歸方程中，即可求出LD50。
3)        方差分析檢定
４. LD50標準誤差和置信區(qū)間（可靠范圍）  上面所求出的LD50是人工飼料飼養(yǎng)的玉米螟幼蟲LD50,其值往往受到所取樣本影響，與昆蟲的群體有一定的差距，即所求的LD50不一定代表群體的實際情況。因此，還需計算出LD50的標準誤差以及置信區(qū)間（可能的實際所在的范圍）。
1）        LD50標準誤差
2）        置信區(qū)間  當(dāng)機率P=0.05,群體自由度df=∞時,查t表：t0.05=1.96,因此,當(dāng)LD505%最小顯著性差異(LSD)0.05=t0.05(df=∞)×Sm=1.96×0.0328=0.0064.但是,由于Sm是LD50標準誤的對數(shù)值,要換算成本來數(shù)值時,不能直接由對數(shù)表查回,因為我們前面用的時log10,因此標準誤差(Sm)由對數(shù)查回的計算方法為:LD50×log10×Sm=0.0078×2.3×0.0064=0.0012．因此玉米螟幼蟲群體LD50的95%置信區(qū)間是0.0078±0.0012=0.0089-0.0067ug/頭之間．
習(xí)作
將實驗結(jié)果列成表格，分別用作圖法即回歸方程求LC50或LD50，并且進行可靠性的檢驗。

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